ביוכימיה מעבדה (0455.2665) Biochemistry Laboratory

קינטיקה אנזימטית, פגישה אחת Butyryl choline esterase כמודל ללימוד קינטיקה אנזימטית: 1. קביעה של קבוע מיכלאיס-מנטן Km ושל המהירות המירבית Vmax על ידי שימוש בנתונים מגרף רציפקוקאלי לפי Lineweaver Burke 2. אפיון עיכוב תחרותי של האנזים ע”י הסם ההלוצינוגני phencyclidine וקביעה של קבוע העיכוב Ki 3. רכישת נסיון בשימוש ב-microplate reader, ספקטרופוטומטר המאפשר מדידה בו זמנית של 96 ריאקציות. ================================ הפרדת חלבונים מתערובת ואפיונם, שתי פגישות הפרדת ליזוזים ואובומוקואיד מתערובת ע”י כרומטוגרפיה של החלפת יונים 1. קביעת הפעילות האנזימטית של ליזוזים 2. עיכוב של פעילות האנזים הפרוטאוליטי טריפסין על ידי אובומוקואיד מחלבון ביצה 3. קביעת המסה המולקולרית של חלבונים על ידי אלקטרופורזה בגל פוליאקרילאמיד בנוכחות דטרגנט בתנאים דנטורטיבים Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE 4. הקניית המושגים יחידת פעילות אנזימטית, פעילות ספציפית, דרגת נקוי, ניצולת. 5. לימוד המעלות והחסרונות של שיטות שונות לקביעת ריכוז חלבון. ================================= ביוסינתזה של שומנים , פגישה אחת שימוש בחומר רדיואקטיבי [חומצת חומץ מסומנת ב-14 [C במעקב אחרי מסלול מטבולי 1. יצירה של חומצות שומן ע”י אנזימים מסיסים מכבד חולדה 2. אינקורפורציה של חומצות שומן לגליצרידים ופוספוליפידים ע”י אנזימים ממברנאלים מכבד חולדה. 3. זיהוי וקביעה כמותית של תוצרי המסלול הביוסינתטי ע”י כרומוטוגרפיה ברבדים דקים. 4. שימוש במונה קרינת beta ובפוספוראימאג’ר ו-phosphorimager. 5. עיכוב ביוסינתזה של ליפידים ע’’י DHEA, הורמון מונע השמנה. 6. הקניית כללי בטיחות והרגלי עבודה בשימוש בחמר רדיואקטיבי. =========================================== שיעתוק, פגישה אחת יצירת RNA על תבנית של DNA ואפיון תוצרי השעתוק 1. שיעתוק סימולטני של שני רצפי DNA הנשלטים כל אחד על ידי פרומוטר ייחודי, על ידי T3 RNA polymerase ו-T7 RNA polymerase 2. בידוד תוצרי השיעתוק ואפיונם לפי אורכם ע”י אלקטרופורזה בגל אגארוז. 3. אפיון תוצרי השיעתוק על ידי היברידיזציה עם אוליגונוקלאוטידים סינתטים מסומנים בביוטין [Northern blot] , וגילוי חומצות גרעין בשיטת Enhanced Chemiluminescence, 5. גילוי, זיהוי ואפיון של DNA ותוצרי השיעתוק שלו בג’ל על ידי שימוש בגלאים פלורסצנטים הבולעים אור אינפרא אדום ]IRdyes, Odissey infrared imager[ =========================================== אינדוקציה של גן זר Transgene, פגישה אחת ערור הביטוי של גן המקודד לאנזים gama-glutamyl transpeptidase מאדם, הנמצא תחת בקרה של הפרומוטר ל- metallothioneine מכבש, שהוכנס לתאי עכבר. 1. אינדוקציה של הטראנסגן ע”י אבץ. 2. קביעת הפעילות הספציפית של האנזים כפונקציה של ריכוז המשרן 3. קביעת מיקום האנזים בממברנת התא. 4. זיהוי האנזים בחתכי כלית עכבר בגל ע”י צביעה היסטוכימית המבוססת על הפעילות האנזימטית. תחילת הקורס בשבוע הראשון של סמסטר ב’ בתחילת כל שבוע יתקיים שיעור פרונטאלי כהקדמה למעבדה של אותו שבוע. . ההופעה חובה בקורס שש פגישות בלבד. הכנת המעבדות מסובכת ויקרה. לפיכך, הכלל של עזיבת הקורס בשבועיים הראשונים של הסמסטר אינו חל על הקורס הזה. וחיסורים, למעט אלה הנובעים ממחלה או מילואים יפגעו בציון הסופי.

דרישות קדם: .

נוכחות חובה

הרכב ציון: מטרות המעבדה: הקניית מושגי יסוד,ידע ומיומנות בעבודה כמותית במעבדה ביולוגית. הקניית מיומנות בניתוח תוצאות והסקת מסקנות מטרה מרכזית היא הקניית ידע ומיומנות בכתיבת טקסט מדעי [דו”ח מעבדה] הרכב הציון: דו’’ח 65% הערכת המדריכות/מדריכים 35% הערכת העבודה: היחס לעבודה, סדר בעבודה, טיב התוצאות, מענה על שאלות בעל פה

ספרות: ספרי ביוכימיה בספריה: הדפים הרלוונטים מצוינים בחוברת המעבדה